大鼠肝脏细胞核制备方法

从大鼠肝脏组织中制备细胞核需采用差速离心结合蔗糖密度梯度法。取20 g新鲜肝脏，经冰上预冷的Thomas C型组织研磨器（配锯齿Teflon研杵）匀浆裂解，裂解缓冲液含RSB成分及终浓度0.5 mmol/L PMSF，全程维持4℃操作。

匀浆液经四层粗孔滤纸冰浴过滤后，与等体积2 mol/L蔗糖溶液分层叠加于SW28超速离心管中，4℃、23000 g离心30分钟。离心后细胞核沉淀位于蔗糖界面下方，弃上清，沉淀用2 ml裂解缓冲液重悬，合并后1500 g低速离心5分钟进一步纯化。

最终获得的细胞核沉淀以Hoechst 33258染色镜检确认完整性，典型得率可达每克肝脏约1×10⁸个完整细胞核，纯度＞95%，适用于后续核蛋白提取、ChIP或核骨架分析。所有操作均在冰上完成，确保核膜结构完整性和DNA结合蛋白活性保留。

评论区

kzhibo球迷

大鼠肝脏核提取太关键了！裂解缓冲液pH一偏，细胞核就“罢工”了～

2026-02-26 16:18:08

kzhibo球迷

蔗糖密度梯度离心后那条清晰的核带，像极了熬夜做实验的我——又脆又亮！

2026-02-26 02:18:15

kzhibo球迷

Hoechst 33258染核真绝，蓝光下细胞核眨眼睛，仿佛在说“我纯度99.9%！”

2026-02-26 04:23:02

kzhibo球迷

制备大鼠肝脏细胞核时，梯度离心转速差200rpm，核得率直接“emo”了…

2026-02-26 03:46:06

kzhibo球迷

裂解缓冲液里加不加PMSF？老手都懂：少一秒，蛋白酶就开“庆功宴”！

2026-02-26 14:07:52

kzhibo球迷

从肝脏到高纯核，蔗糖梯度是温柔刀，Hoechst是验明正身的“DNA身份证”！

2026-02-26 21:30:14

kzhibo球迷

大鼠肝核制备成功那一刻，离心管里的蓝光比情人节烛光还让人心动～

2026-02-26 16:20:57

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